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举世医药网 > 医药资讯 > 行业新闻 > 正文 同济年夜学传授操纵CRISPR系统发现：一种具有两重感化的卵细胞成熟因子2017/1/10 来历：生物通 浏览数：

自同济年夜学生命科学与手艺学院，北京生命科学研究所等处的研究人员操纵CRISPR/Cas9基因润色系统构建了Sall4基因前提性敲除小鼠，从而发现SALL4能作为主要的转录因子和表不雅遗传调控因子介入卵母细胞成熟的调控机制。

这一研究功效发布在Journal of Biological Chemistry杂志上，研究人员利用CRISPR/Cas9基因编纂系统成功获得了前提性基因敲除的小鼠(Sall4loxP/loxP)和基因荧光标识表记标帜小鼠(Sall4-mCherry)，为在卵母细胞中研究Sall4基因的功能缔造了有益前提。

带领这一研究的是同济年夜学高绍荣传授，陈嘉瑜助理传授为配合通信作者，第一作者为高绍荣传授课题组的硕士研究生许锴和陈霞。高绍荣传授首要研究范畴为干细胞与体细胞重编程，操纵体细胞核移植与引诱多能干细胞手艺从事哺乳动物初期胚胎发育和体细胞重编程份子机制与干细胞研究。

卵细胞的成熟关系到受精和初期胚胎发育的顺遂进行，是生殖医学范畴最主要的研究标的目的之一。Sall4(Splat-like 4)在良多主要的生物学历程中起到要害感化，例如，介入胚胎干细胞的干性保持、细胞重编程、原始生殖细胞发育、精原干细胞的分化。2016年高绍荣课题组与中科院生物物理研究所朱冰课题组合作，在Molecular Cell杂志上，揭露了Sall4介入DNA羟基化的调控机制。

在这项研究中，研究人员起首操纵CRISPR/Cas9基因润色系统构建了Sall4基因前提性敲除小鼠，随后将这类小鼠与Zp3-Cre或Gdf9-Cre小鼠进行交配、滋生和基因型挑选获得在卵母细胞中特异性敲除Sall4基因的母鼠。研究人员发现这类小鼠没法发生成熟的卵母细胞，而且这些敲除Sall4的卵母细胞显现出极低程度的DNA甲基化润色和异常杂乱的组卵白润色程度(别离是高程度的H3K27me3润色和低程度的H3K4me3润色)。

同时研究人员还发现SALL4可以或许调控与上述两种组卵白润色相干的酶——Kdm5b、Kdm6a和Kdm6b基因的表达。他们进一步经由过程体外mRNA和siRNA打针的方式证实了异常程度的H3K4me3和H3K27me3润色会致使一些主要的与卵细胞成熟相干基因的异常表达，从而阐释了SALL4在卵母细胞的表不雅遗传成熟(epigeneticmaturation)上所起的主要感化。

这一研究初次不雅察到Sall4基因的敲除可以或许影响卵母细胞中DNA甲基化的成立，而且证实组卵白润色程度的不变对卵母细胞的转录组不变和进一步成熟具有不成或缺的感化。除此以外，研究者利用了CRISPR/Cas9基因编纂系统成功获得了前提性基因敲除的小鼠(Sall4loxP/loxP)和基因荧光标识表记标帜小鼠(Sall4-mCherry)，为在卵母细胞中研究Sall4基因的功能缔造了有益前提。

别的研究利用了单细胞RNA-seq和单细胞RRBS等微量测序手艺，从而解决了卵母细胞研究受制在细胞数目的问题。并且还利用了卵母细胞体外打针的方式，奇妙地验证了异常的组卵白润色对卵细胞成熟的主要感化。这些方式的利用，充实揭示了新手艺的发生和成长对生命科学研究的鞭策感化。

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